产品货号:
JN0018
中文名称:
Taq Plus DNA聚合酶
英文名称:
Taq Plus DNA Polymerase
产品规格:
250U|1250U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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Taq Plus DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶按特定比例混合而成。Taq Plus DNA聚合酶具有Taq DNA聚合酶很强的DNA聚合能力,同时由于Pfu DNA聚合酶的存在,具有一定的保真特性,能部分纠正DNA扩增过程中所出现的错误。与Taq DNA聚合酶相比,具有扩增长度增加(简单模板可有效扩增20kb,复杂模板可有效扩增10kb),保真度好的特点。与Pfu DNA聚合酶相比,具有扩增能力强,反应效率高的优势。使用本制品扩增得到的PCR产物具有3'端"A"突出,因此可直接克隆于T载体中。
- 可替代大部分Taq DNA聚合酶的用途;
- 需高灵敏度的PCR扩增;
- 大片段PCR扩增反应(可达20kb)。
- 高效:以λDNA为模板,扩增长度可达20kb。
- 灵敏:比Taq酶扩增灵敏度更高。
组分 | 250U | 1250U |
Taq Plus DNA聚合酶(5U/μL) | 50μL | 50μL×5 |
5×Taq Plus Buffer with Mg2+ | 1mL×2 | 1mL×10 |
dNTPs (10mM each) | 200μL | 200μL×5 |
保存:-20℃
在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTPs掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留、无核酸内、外切酶污染。
使用本制品扩增得到的PCR产物具有3'端"A"突出,可直接克隆于T载体中。
- 1.5mM Mg2+可满足大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了保证较好的扩增,可调节为1.5~4mM。
- 体系中加入推荐的酶量,可以满足大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了得到较好的扩增,可适当增加酶量。
图1.50μL扩增体系中,以5ng λDNA为模板,对1kb~20kb片段的扩增结果。
泳道1:1kb;泳道2:2kb;
泳道3:4kb;泳道4:6kb;
泳道5:8kb;泳道6:10kb;
泳道7:12kb;泳道8:20kb;
泳道M:λ/Hind III DNA Marker。
- 常用反应体系(50μL):
成分 用量 5×Taq Plus Buffer with Mg2+ 10μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) dNTPs (10mM each) 1μL 模板 1~50ng(质粒)
10ng~1μg(基因组)Taq Plus DNA聚合酶(5U/μL) 0.25μL(1.25U) ddH2O 至50μL - 常用PCR反应程序:
- 当扩增片段<3K:
反应阶段 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 90s 1 变性 94℃ 20s 30 退火 50~60℃ 20s 延伸 72℃ 1kb/60s 终延伸 72℃ 5min 1 保温 4℃ 保温 1 - 当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
反应阶段 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 5min 1 变性 94℃ 5s 30 退火/延伸 68℃ 1kb/60s 终延伸 72℃ 5min 1 保温 4℃ 保温 1
- 当扩增片段<3K:
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